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發(fā)布時(shí)間:2022-04-01 16:12:06 作者:學(xué)術(shù)小編 來源:www.adcyfwr.cn
雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復(fù)性動(dòng)力學(xué)和熱穩(wěn)定性。 雜交液的基礎(chǔ)成分為:Denhardt’s溶液(Ficoll,BSA,PVP),異源核酸(如鯡精子DNA/tRNA/競(jìng)爭(zhēng)DNA),磷酸鈉,EDTA,SDS,鹽離子,甲酰胺和硫酸葡聚糖,以及雜交探針。
原位雜交技術(shù)應(yīng)用于染色體、細(xì)胞和組織切片等樣品中進(jìn)行核酸特異性檢測(cè),與免疫組化技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用,能將 DNA 、mRNA和蛋白水平上的基因活性與樣品的顯微拓?fù)湫畔⒔Y(jié)合起來。 1969年P(guān)ardue和Gall將放射性標(biāo)記的探針直接應(yīng)用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術(shù)的發(fā)展,及不同探針標(biāo)記系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用,大大增加了原位雜交檢測(cè)的應(yīng)用靈活性和檢測(cè)靈敏度。
③RNA 雜交體穩(wěn)定性高,所以探針在雜交反應(yīng)中產(chǎn)生的信號(hào)較DNA 探針強(qiáng),等優(yōu)點(diǎn)。 核酸的分子雜交可分成液相雜交和固相雜交兩大類。 液相雜交是將待檢測(cè)的核酸樣品和同位素標(biāo)記的雜交探針同時(shí)溶于雜交液中進(jìn)行反應(yīng),然后分離雜交雙鏈和未參加反應(yīng)的探針,用儀器計(jì)數(shù)并通過計(jì)數(shù)分析雜交結(jié)果。
1969年P(guān)ardue和Gall將放射性標(biāo)記的探針直接應(yīng)用于純化核酸的雜交,此后得益于分子克隆技術(shù)的發(fā)展,及不同探針標(biāo)記系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用,大大增加了原位雜交檢測(cè)的應(yīng)用靈活性和檢測(cè)靈敏度。 基于地高辛、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測(cè)系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測(cè)方法。